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人白細(xì)胞介素 10(IL-10)ELISA試劑盒簡介

更新時間:2023-07-17      點擊次數(shù):1079

 用于人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細(xì)胞介素 10(IL-10)測定。

作原理

本試盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法 (ELISA) 測定樣品中 人白細(xì)胞介素 10(IL-10)水平。向預(yù)先包被了白細(xì)胞介素 10(IL-10)單克隆抗 的酶標(biāo)孔中加入白細(xì)胞介素 10(IL-10),溫育;溫育后,加入生物素標(biāo)記的 IL-10 抗。再與鏈霉親和素-HRP 結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,再經(jīng)過溫育和洗滌, 去除未結(jié)合的酶,然后加入底物 AB,產(chǎn)生藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終 的黃色。顏色的深淺與樣品中白細(xì)胞介素 10(IL-10)的濃度呈正相關(guān)。

試劑盒組成

試劑盒組成

48 孔配置

96 孔配置

說明

1

1


封板膜

2 (48)

2 (96)


封袋

1

1


標(biāo)包被板

1 ×48

1 ×96

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品 400 ng/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

霉親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

物素標(biāo)記的抗 IL-10 抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃保存

顯色劑 A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

色劑 B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

濃縮洗滌液

(20ml×20 ) × 1

(20ml×30 ) × 1

2-8℃保存





















需要而未提供的試劑和器材

1  37℃恒溫箱。

2.  標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

3.  精密移液器及一次性吸頭

4.  蒸餾水,

5  一次性試管

6  吸水紙

意事項

1.  從 2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少 30 分鐘。酶標(biāo)包 板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2  各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差

3. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

4  為避免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。

5.  不用的其試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

6.  底物 B 對光敏感,避免長時間暴露于光下。

板方法

工洗板方法:甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下 用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少 0.35ml注入孔內(nèi),浸泡 1-2 分鐘。根據(jù)需 要,重復(fù)此過程數(shù)次

洗板:如果有自動洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中

標(biāo)本要求



1不能檢測含NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的 (HRP) 活性。

2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實 驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

作程序

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋: (本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小

試管中進(jìn)行稀釋。)

200 ng/L

5 號標(biāo)準(zhǔn)品

120 μ l 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 120 μ l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

100 ng/L

4 號標(biāo)準(zhǔn)品

120 μ l 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 120 μ l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

50 ng/L

3 號標(biāo)準(zhǔn)品

120 μ l 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 120 μ l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

25ng/L

2 號標(biāo)準(zhǔn)品

120 μ l 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 120 μ l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

12.5 ng/L

1 號標(biāo)準(zhǔn)品

120 μ l 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 120 μ l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 根據(jù)代測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空 孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

3. 樣:1) 空白孔,空白對照孔不加樣品,生物素標(biāo)記的抗 IL-10 抗體,鏈 親和素-HRP,只加顯色劑 A&B 和終止液,其余各步操作相同2) 標(biāo)準(zhǔn)品 孔:標(biāo)準(zhǔn)品 50ul,鏈霉親和素-HRP50ul(標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素 抗體,故不加);3) 代測樣品孔:加入樣本 40ul,然后各加入 IL-10 抗體 10ul鏈霉親和素-HRP50ul,蓋上封板膜,輕輕震蕩混勻,37℃溫育 60 分 鐘。

 4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后 棄去,如此重復(fù) 5 次,拍干。

6. 顯色:每孔先加入顯色劑A50ul,再加入顯色劑 B50 μ l,輕輕震蕩混勻,37℃ 避光顯色 15 分鐘.

 7. 終止:每孔加終止液 50 μ l終止反應(yīng) (此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

 8. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度 (OD 值) 。  測定應(yīng) 在加終止液后 10 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

 9. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD 值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù) OD 值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟 來計算。

操作程序總結(jié):

1.準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

2.加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,生物素標(biāo)記的二抗和酶標(biāo)試劑,37℃反應(yīng)60分鐘

3.洗板5次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘

4.加入終止液

5.10分鐘內(nèi)讀OD值

6.計算


檢測范圍:6ng/L →200 ng/L

存:2-8℃。

有效期:6 個月(2-8℃)。




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