抗體或蛋白質(zhì)標(biāo)記是指將目標(biāo)物質(zhì)（酶、熒光素、生物素）與抗體或其他蛋白質(zhì)共價連接，并與生成測試物質(zhì)發(fā)生特異性反應(yīng)，形成多重復(fù)合物。借助熒光顯微鏡、射線測量儀、酶標(biāo)檢測儀、電子顯微鏡、發(fā)光免疫分析儀等精密儀器，可通過顯微鏡直接觀察檢測結(jié)果或在細(xì)胞、亞細(xì)胞、超微結(jié)構(gòu)、分子水平上自動測定檢測結(jié)果。對抗原和抗體反應(yīng)進(jìn)行定性和定位研究，或應(yīng)用各種液相和固相免疫分析方法定性和定量測定體液中的半抗原和抗原。現(xiàn)在，抗體標(biāo)記技術(shù)已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)病理學(xué)、免疫組織化學(xué)、分子生物學(xué)、生物制藥等領(lǐng)域的分析研究和技術(shù)測定。常見的抗體標(biāo)記技術(shù)包括酶標(biāo)記、生物素化標(biāo)記和熒光素標(biāo)記。

常用的抗體/蛋白質(zhì)標(biāo)記技術(shù)

1. 酶標(biāo)記

通過合適的方法將酶與抗體或蛋白質(zhì)共價鍵合，制成酶標(biāo)記抗體。然后，通過酶對底物的特異催化作用，生成有色不相容產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒。這些有色產(chǎn)物可用肉眼、光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡觀察。也可以用分光光度計來測量。顏色反應(yīng)表明酶的存在，證明相應(yīng)的免疫反應(yīng)已經(jīng)發(fā)生。

蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)綴合通常使用雙功能接頭交聯(lián)劑進(jìn)行。交聯(lián)劑（NHS酯）的一端與氨基酸賴氨酸和N端的胺（-NH2）反應(yīng)，另一端（馬來酰亞胺胺）與硫醇基（-SH）反應(yīng)存在于氨基酸中。然而，SMCC 修飾的蛋白質(zhì)極其不穩(wěn)定，并且通常會發(fā)生自身反應(yīng)。

2. 生物素標(biāo)記

親和素和生物素可以與蛋白質(zhì)（抗原、抗體、酶）、熒光劑和其他分子結(jié)合，而不影響后者的生物活性。是一種理想的標(biāo)記劑。一個抗體分子可與數(shù)十個生物素或親和素分子偶聯(lián)，親和素或生物素分子可與酶或熒光素結(jié)合形成生物放大系統(tǒng)，顯著提高檢測的靈敏度。常用的有親和素-生物素標(biāo)記法、親和素-生物素橋法、親和素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物法。

3. 熒光標(biāo)記

染料與蛋白質(zhì)的結(jié)合需要染料與蛋白質(zhì)之間形成穩(wěn)定的共價鍵，并且這種共價鍵在大多數(shù)情況下都不能斷裂。與蛋白質(zhì)固有的熒光相比，小型有機(jī)染料在選擇標(biāo)記位點和增強(qiáng)熒光方面具有更大的靈活性，已廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)標(biāo)記。用適當(dāng)?shù)?/span>熒光染料標(biāo)記后，蛋白質(zhì)可以在各種生物過程中可視化，以便可以在生化測定中量化或定位在細(xì)胞研究中心。染料-蛋白質(zhì)綴合物已成為研究酶活性、蛋白質(zhì)相互作用、構(gòu)象變化以及調(diào)節(jié)和觀察特定生物過程的非常重要的工具。它們已廣泛應(yīng)用于 ELISA、蛋白質(zhì)印跡、流式細(xì)胞術(shù)和細(xì)胞成像。