DNA定量分光光度計(jì)對(duì)濃度的測(cè)定判定
更新時(shí)間：2025-06-25 點(diǎn)擊次數(shù)：381
DNA定量分光光度計(jì)是一種基于核酸分子在特定波長(zhǎng)下對(duì)紫外光的吸收特性來(lái)測(cè)定DNA濃度的儀器，其濃度測(cè)定判定主要依據(jù)吸光度值（A）及相關(guān)比值，以下為你詳細(xì)介紹： 濃度測(cè)定原理
DNA分子中的堿基具有共軛雙鍵結(jié)構(gòu)，在260nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰。根據(jù)朗伯-比爾定律，吸光度與溶液中吸光物質(zhì)的濃度成正比，即A=
varepsiloncl（其中A為吸光度，
varepsilon為摩爾吸光系數(shù)，c為溶液濃度，l為光程長(zhǎng)度）。通過(guò)測(cè)量DNA溶液在260nm處的吸光度，再結(jié)合已知的摩爾吸光系數(shù)和光程長(zhǎng)度，即可計(jì)算出DNA的濃度。
?比值應(yīng)大于2.0。如果比值低于2.0，可能表示樣品中存在鹽離子、酚、氯仿等雜質(zhì)。
影響測(cè)定結(jié)果的因素及注意事項(xiàng)
樣品純度：樣品中的蛋白質(zhì)、RNA、鹽離子、有機(jī)溶劑等雜質(zhì)會(huì)影響吸光度的測(cè)量，從而影響濃度測(cè)定的準(zhǔn)確性。因此，在測(cè)定前應(yīng)盡量提高DNA樣品的純度。
樣品稀釋：如果樣品濃度過(guò)高，需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尅Ｏ♂寱r(shí)應(yīng)使用與測(cè)量時(shí)相同的緩沖液，并且要準(zhǔn)確記錄稀釋倍數(shù)。
儀器校準(zhǔn)：定期對(duì)分光光度計(jì)進(jìn)行校準(zhǔn)，確保儀器的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。校準(zhǔn)包括波長(zhǎng)校準(zhǔn)和吸光度校準(zhǔn)等。
測(cè)量環(huán)境：測(cè)量時(shí)應(yīng)避免強(qiáng)光直射和溫度變化過(guò)大，以免影響測(cè)量結(jié)果。同時(shí)，要保持比色皿的清潔，避免劃痕和污染。
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